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• 塑料包埋不脱钙大块骨组织切片及染色
• 发布时间：2016-02-01 浏览次数：251

• 　　◎迈新技术交流塑料包埋不脱钙大块骨组织切片及染色吕荣徐新智王军2500型切片机，制作塑料包埋不脱钙大块骨组织切片，获得8~ 10Pm厚完整切片。游离片染色，着色效果良好。

  　　1材料与方法1.1取材部位狗挠骨，大小35mmX 20%中性福尔马林液内固定1~2d流水冲洗1~2h1.2包埋剂的制备1号试剂：甲基丙稀酸甲脂400ml邻苯二甲酸二丁酯100ml二甲苯500ml2号试剂：甲基丙稀酸甲酯800ml，邻苯二甲酸二丁酯200ml 3号试剂：甲基丙稀酸甲酯800ml过氧化苯甲酰20g邻苯二甲二丁酯200mL4号试剂：甲基丙稀酸甲酯800ml过氧化苯甲酰60g邻苯二甲酸二丁酯200ml.（过氧化苯甲酰需在37°C烘箱内干燥24h后方可使用，3号、4号试剂配制完毕后储存于4C冰箱中）1.3脱水与包埋1.3.1骨组织浸入70%，80%，90%，正丁醇，无水乙醇1 11，二甲苯111，各2h 1.3.2浸入1号，2号，3号包埋剂内各2~ 1.3.3将干燥后的样品置于小玻璃瓶中（小玻璃瓶容量大小一般为样本的3~5倍）1.3.4用铅笔书写标签纸，并用透明胶带粘于玻璃瓶体上。

  　　1.3.5将玻璃瓶放入抽真空泵内（一0.64个大气压）抽1~ 1.3.6小玻璃瓶加盖，并穿入7号针头2个（排气），在放入抽真空泵继续抽1h放入37C烘箱内1d完全凝固后，将玻璃瓶置于一30 C冰箱15min取出用布包瓶，敲碎玻璃瓶，取出包埋块，并即时标记。

  　　1.4切片的制作对包埋块适当修整，使其能固定于切片机上。切片厚度10Pm1.5游离片染色1.5.1切片的准备切片浸入0. 1%甲酸10min自来水10次/min：20010328修改日期：2001 0725作者单位：第四军医大学西京医院全军骨科研究所，西安710032 1.5.2染液的制备A液：固绿FCF 3.75g蒸馏水500mW水醋酸6mlB液：天青1 1.5g蒸馏水250ml.C液：碱性品红5g将A、B、C液混合，搅拌，溶解后过滤，60C干燥，制成骨染色粉。使用前用70%乙醇100ml加骨染色粉0. 1.5.3骨粉染色液内10min蒸馏水洗3次，无水乙醇3次/2min中性树胶封固2结果3体会3.1影响因素（1）温度：高温可引起爆聚，包埋块变脆。（2）必须充分抽真空，如抽真空不彻底，组织块内残留大量气泡，影响切片质量，甚至造成切片完全失败。（3）漂片水温过高塑料易溶解，水温过低塑料及组织不宜展平。（4）染色时间的长短决定染色的深浅。（5）过氧化苯酰的量应根据温度高低而定，一般为20 3.2缺点（1）周期长，从固定、脱水、浸塑、切片约需2周。（2）包埋液在聚合时易产生气泡。（3）切片不易摊平。（4）由于脱片不宜做组化和杂交方面的染色，只实用于做游离染色。

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